美国nightsea SFA DFP荧光滤光片的选择指南

   由于GFP（绿色荧光蛋白）和其他绿色发光体（例如FITC）是使用广泛的荧光染料，因此我们的宝蓝色激发/发射装置是体视镜荧光适配器常用的选择。在黄色Longpass和绿色bandpass屏障滤波器选项之间进行选择时，经常会要求我们提供建议。本文将介绍每种方法的优缺点。

光谱特性

• Longpass –传输所有大于500nm的波长
• bandpass –仅在500 – 560nm之间传输

实际上，这意味着bandpass仅传输绿色波长，而Longpass则传输绿色，黄色，橙色和红色。

滤光片作用

     荧光应用中任何滤光片的目的都是为了增加您想要看到的东西（“信号”）的观看对比度。主要工作是阻挡来自激发源的反射光并透射荧光发射。其他潜在的干扰源（“噪声”）是观看区域中其他物质的荧光，这些物质可以掩盖目的信号。这可能是来自诸如生长培养基（与秀丽隐杆线虫一起使用时）或对象本身的一部分（例如植物中的叶绿素或发育中的斑马鱼卵黄）之类的背景荧光。

Longpass滤光片和bandpass滤光片都可以很好地阻挡激发光。

尽管您可能会认为选择与预期释放量紧密匹配的滤光片会更好，但这并非总是如此。

    如果您要消除的噪声与信号没有重叠，则bandpass是一个不错的选择。例如，在拟南芥或其他植物中，叶绿素发出的红色荧光就是这种情况，如下图所示*。叶绿素发出远红色的光，其峰值在约685 nm处。在使用Longpass滤光片制作的左侧图像中，红色荧光难以区分绿色GFP荧光。绿色的bandpass滤光片消除了这种情况，使您很容易看到叶子中的GFP荧光。

      如果噪声与信号频谱重叠，则bandpass滤波器可能会引起混淆。使用Longpass滤波器，您可以通过两种潜在的方式将信号与噪声区分开：强度和 颜色。使用bandpass滤镜，您可以删除颜色（光谱），而仅保留强度。下面的荧光转基因斑马鱼图像说明了这一点。这条鱼**在心脏中表达GFP，在血细胞中表达mCherry。下图是两幅图像的合成-一幅是使用Longpass滤波器拍摄的，另一幅是使用绿色bandpass滤波器拍摄的。

通过Longpass（顶部）和bandpass滤光片拍摄的转基因荧光斑马鱼

     在顶部图像中，您可以看到绿色荧光的心脏，红色荧光的血细胞和蛋黄的天然黄色荧光。这些很容易区分。在下部图像中，所有内容均以不同的绿色强度显示。心脏明亮，但蛋黄没有那么暗。说所有绿色都与GFP表达有关是不正确的。在这种情况下，*好使用Longpass滤镜观看物体。

      在某些情况下，选择不太明显。秀丽隐杆线虫的生长培养基具有一些背景绿色荧光。与黄色长通相比，绿色bandpass滤镜确实增加了一些清晰度和对比度。在许多测试中，我们让数名观察员观察了相同的样本。有些人喜欢长通，因为他们认为这实际上有助于查看背景的某些背景，而另一些人则喜欢同一样品的带通。在这种情况下，很可能还有其他选择，选择并不*明显，可能取决于个人喜好。

如果您正在自然探索荧光？长传肯定是要走的路。您无法使用带通滤镜捕获此草花的图像。

* 拟南芥  由波士顿大学的John Celenza博士提供。

**斑马鱼由Martha Marvin博士（威廉姆斯学院）提供，这是由Lara Hutson博士（布法罗大学）培育的转基因品系。